Vistas:0 Autor:Editor del sitio Hora de publicación: 2021-11-20 Origen:Sitio
Cuando máquinas de PCR detectar factores de microinfección, son propensos a diversos problemas debido a la contaminación.Por lo tanto, al operar máquinas de PCR, los operadores deben seguir estrictamente algunos procedimientos operativos para minimizar la posible contaminación de PCR o eliminar la aparición de contaminación y otros problemas.A continuación se describirá el uso de máquinas de PCR y las precauciones.
Aquí está la lista de contenidos:
l Instrucciones para el funcionamiento de la máquina PCR.
l Notas sobre el uso de máquinas PCR.
l Métodos de cuidado y mantenimiento de instrumentos de PCR.
1. Cebadores: determinar la especificidad de máquina de PCR amplificación.Se utilizan diferentes cebadores según la prueba de ADN y cada microorganismo patógeno tiene sus propios cebadores específicos.
2. ADN polimerasa resistente al calor: esta enzima se aísla de bacterias resistentes al calor y puede soportar altas temperaturas de 90 °C a 100 °C.
3. Tampón de máquina de PCR 10×: 500 mmol/l de KCl;100 mmol/L Tris-HCl (pH 8,4,20 ℃) 150 mmol/L MgCl2, 1 mg/ml de gelatina.Se adquirió tampón de PCR 10X junto con la enzima.
Solución madre de máquina de PCR dNTP de 4,5 mmol/L: combine 100 mg de cada una de las sales de sodio de dATP, dCTP, dGTP y dTTP, agregue agua desionizada esterilizada para disolver, ajuste el pH a neutro con NaOH, dispense 300 μl de cada una y almacene a -20 ℃ .La concentración de dNTP se determina mediante el método de absorción UV.Las soluciones dNTP disponibles ahora son productos comercializados.
5. Plantilla de ADN: la muestra a analizar se trata con una solución de tratamiento.Los diferentes tratamientos y operaciones varían, pero el propósito es exponer el ADN que se analiza en la muestra de la máquina de PCR.
1. La máquina de PCR debe colocarse sobre una plataforma horizontal y resistente con un voltaje correspondiente al sistema de alimentación externo y se requiere un buen cable de conexión a tierra.
2. La temperatura ambiente se mantiene en aproximadamente 23 ℃ y la humedad en aproximadamente 60 %.
3. La máquina de PCR debe estar equipada con un regulador de voltaje de potencia ≥ 3000W.
4. Debe limpiarse y mantenerse periódicamente.
5. Al utilizar la máquina de PCR, se deben seguir estrictamente los pasos de uso anteriores.
1. Limpieza de la cubeta primero abra la tapa de la máquina de PCR, luego remoje la cubeta con etanol al 95 % o solución de limpieza al 10 % durante 5 minutos y luego limpie los pocillos contaminados;aspirar el líquido con una micropipeta y utilizar un bastoncillo de algodón para absorber el líquido restante;Encienda la máquina de PCR, configure el programa de PCR para mantener la temperatura a 50 °C y hágalo funcionar, y deje que el líquido residual se evapore y se retire.Normalmente, 5-10 minutos son suficientes.
2. Limpieza de la cubierta en caliente para la máquina de PCR cuantitativa fluorescente, cuando hay contaminación fluorescente y esta contaminación no proviene de la cubeta, o cuando hay contaminación o residuos que afectan la cubierta caliente de la máquina de PCR suelta, es necesario utilizar aire comprimido o agua pura para limpiar la parte inferior de la cubierta de la almohadilla, para garantizar que el orificio de la cubeta esté limpio y que no haya suciedad bloqueando el camino óptico.
3. Limpieza de la superficie externa del instrumento de PCR La limpieza de la superficie externa del instrumento puede eliminar el polvo y la grasa, pero no hasta el efecto de la desinfección.Elija un agente de limpieza no corrosivo para limpiar la superficie externa de la máquina PCR.
4. Reemplace el fusible, primero apague la máquina PCR, desenchúfela, abra la caja de fusibles al lado del conector de alimentación, reemplácela con un fusible de repuesto y observe si vuelve a la normalidad.
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