Vistas:0 Autor:Editor del sitio Hora de publicación: 2022-05-25 Origen:Sitio
La preparación de una solución de oro coloidal para la prueba de antígeno Adopta el método de reducción con citrato trisódico para preparar una solución de oro coloidal.Tomar 1000 mL de agua ultrapura y calentar hasta ebullición en un agitador magnético, agregar 40 mL de solución de ácido cloroáurico al 1%, cuando la solución hierva nuevamente, agregar rápidamente 36 mL de solución de citrato trisódico al 1%, continuar hirviendo cuando el color de la solución se vuelve violeta después de 5 minutos, apague el calentador y restablezca el volumen original con agua ultrapura después de enfriar.El diámetro promedio y el potencial Zeta de las partículas de oro coloidal se midieron con un analizador de tamaño de nanopartículas y se almacenaron a temperatura ambiente en la oscuridad.Entonces, ¿cuál es la información sobre la preparación de soluciones de oro coloidal para la prueba de antígeno?Vamos a ver.
Aquí está la lista de contenidos:
l Preparación de conjugados marcados con oro coloidal
l Preparación de tiras reactivas rápidas de antígenos.
l Límite mínimo de detección
l prueba de estabilidad
Tomar 100 mL de oro coloidal de prueba de antígeno en dos vasos limpios, respectivamente, de acuerdo con las condiciones de pH marcadas y optimizadas, agregar 3,3 mL y 2,1 mL de carbonato de potasio 0,1 mol/L para ajustar el pH, agitar con un agitador magnético a 300 r/ min durante 10 min, y se añadió anticuerpo monoclonal anti-proteína N de ratón y proteína DNP-BSA cada uno, 1 mg y se agitó durante 15 minutos;Se añadieron 2 ml de solución de BSA al 10 % y se añadieron 2 ml de solución de BSA al 10 % y se continuó la agitación durante 20 minutos;después de agitar, la solución de oro coloidal de prueba de antígeno se transfirió a dos tubos de centrífuga de 50 ml, se establecieron los parámetros de la centrífuga en 9000 r/min, 20 min y 4 °C, y se realizó la centrifugación.Después de la centrifugación, sacar el tubo de centrífuga con cuidado, no agitar, retirar el sobrenadante con una pipeta, recoger el precipitado, reconstituirlo con diluyente conjugado hasta 10 ml y almacenar a 4°C en la oscuridad.El diámetro promedio y el potencial Zeta de las partículas de conjugado de oro coloidal de la prueba de antígeno se midieron mediante un analizador de tamaño de nanopartículas.
La almohadilla de muestra se recubrió uniformemente con la solución de tratamiento de la almohadilla de muestra y la cantidad de recubrimiento de cada fibra de vidrio fue de 30 ml y se secó a 50°C durante 24 horas.Diluir el prueba rápida de antígenos Anticuerpo monoclonal de ratón anti-proteína N marcado con oro coloidal y conjugado de proteína DNP-BSA marcado con oro coloidal con diluyente de conjugado, la proporción de volumen es del 18% y 20%, respectivamente, y se trata con el conjugado de oro coloidal diluido, la almohadilla del acoplador fue uniforme recubierta con líquido, la cantidad de recubrimiento de cada fibra de vidrio fue de 30 ml y se secó a 45°C durante 24 h.El anticuerpo monoclonal anti-proteína N de ratón y el anticuerpo policlonal anti-DNP de conejo se diluyeron con PBS que contenía 0,01 mol/l, pH 7,4 y trehalosa al 5 % hasta una concentración de 2,0 mg/ml y 1,0 mg/ml, respectivamente.Como línea de detección (línea T) y línea de control de calidad (línea C), el anticuerpo de captura se recubrió con una membrana de nitrocelulosa (membrana NC) y se secó a 45 °C durante 48 h.La película NC preparada, la almohadilla de conjugado, la almohadilla de muestra y la almohadilla absorbente de agua se pegaron a su vez en la placa inferior de PVC, se cortaron en tiras de 3 mm con una cortadora, se colocaron en una caja de tarjetas y se empaquetaron en una bolsa de papel de aluminio.Durante la prueba, inserte el hisopo nasofaríngeo en el tubo de elevación precargado con la solución de extracción (10 mmol/LPBS, pH 7,4, 1 % NP-40) y agregue 3 gotas (100 μl) gota a gota al orificio de muestra de la prueba. tarjeta después de la extracción durante 15 s.Tiempo de reacción de 15 minutos para interpretación visual.La línea T y la Cline de la prueba de antígeno son positivas, la línea T no está coloreada, la Cline es negativa, la Cline no está coloreada, lo que indica que la tira reactiva es efectiva y es necesario volver a analizarla.
Los estudios de límites mínimos de detección se realizaron con cultivos de virus muertos por calor.El eluato de hisopos nasofaríngeos de personas sanas se utilizó como matriz negativa para la prueba de Antígeno.Primero, se realizó una dilución en gradiente de 10 veces.Tras el resultado negativo de la prueba rápida de Antígenos, la concentración anterior pasó a ser una dilución en gradiente de 2 veces y no menos de 19 veces de 20 pruebas fueron positivas.El nivel de concentración (≥95%) se utilizó como límite mínimo de detección del reactivo.
Coloque la tarjeta de reactivos terminada de la prueba de antígeno preparada en un horno a 50 °C y realice la prueba con sustancias de control de calidad de concentración alta y baja cada dos semanas.Repita la prueba 3 veces para cada muestra.La diferencia en la profundidad de la banda entre el reactivo de destrucción acelerada a alta temperatura y el reactivo de control durante 1 semana y 8 semanas.
Lo anterior es la información relevante sobre la preparación de la solución de oro coloidal para la prueba de Antígeno.Si estás interesado en el Prueba rápida de antígenos COVID-19, Prueba Rápida de Antígeno SARS-CoV-2, puedes contactarnos.Nuestro sitio web es www.bioteke.cn.
